葡萄糖钳夹技术大致分为高胰岛素正糖钳夹技术、高葡萄糖钳夹技术、低葡萄糖钳夹技术、扩展葡萄糖钳夹技术。其中,高胰岛素正糖钳夹技术能在胰岛素-葡萄糖代谢平衡状态下精确测定组织对胰岛素的敏感性、可重复性等优点,已成为评价机体胰岛素对葡萄糖作用的“金标准”。该平台由于能很好的排出内院胰岛素及升糖因素的影响,并能同时客观的反应外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点,在研发新兴胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为了目前国际公认可靠方法。在临床实验中,高葡萄糖钳夹技术是评价评价外源性胰岛素制剂的客观的平台,该平台可反应胰岛素β细胞对葡萄糖刺激后的胰岛素分泌能力及胰岛素对葡萄糖的作用,平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中,使用高胰岛素正糖钳夹技术存在一些常见份问题,需要在今后应用该技术中加以关注。
关注要点:
1、成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件:
(1)形成稳定高胰岛素状态,大道完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;
(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;
(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2、高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹实验技术在临床实验中需要关注如下几点:
(1)血糖胰岛素保持有事浓度,充分抑制肝糖输出
在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持优势浓度(一般接近100U/L),人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制,葡萄糖输注率(GIR)方能真是反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
(2)检测血糖间隔时间
每5分钟检测一次静脉血糖值,根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖维持在目标值,变异系数应小于5%。目标血糖需控制在正常空腹血糖±10%范围内。检测血糖的时间如果过长,很难将平台稳定好,易造成血糖波动引起内源性胰岛素和升糖激素的变化。
(3)充分抑制内源性胰岛素的分泌情况,对平台的稳定尤为重要,稳态后C肽应抑制为<基础水平的60%
(4)控制各种干扰因素
选择女性受试者时,需要考虑月经周期对胰岛素敏感性进而对GIR造成影响。
消除患者紧张盒顾虑,稳定患者的情绪,以避免对胰岛素敏感性的影响,才不会对实验结果有影响。
整个试验过程,要求患者保持清醒状态,不能入睡。因为清醒盒入睡时下丘脑、靶腺所分泌的各种激素可能有差异,因此,是受试者基础状态一致,减少实验误差。
(5)预防低血糖
实验完毕继续输注葡萄糖液30分钟,给病人喝葡萄糖水和进食饼干、面包或糕点,防止低血糖的发生,并密切观察患者情况。
低葡萄糖钳夹技术用于研究胰岛素介导的低血糖反应与抵抗机制。扩展的葡萄糖钳夹技术则是在原有的技术基础上,根据不同的研究目的,结合其他方法进行操作的一项拓展技术。
胰岛素抵抗是目前公认的引起2型糖尿病的一个重要的致病因素,是指胰岛素效应器官货部位对胰岛素生理作用不敏感的一种病理生理状态,表现为靶器官,如肝脏、肌肉、脂肪组织等对胰岛素介导的葡萄糖代谢作用下降。